Tek dünya tek kavga
─COVID-19 pandemi mücadelesine yanıt veren ortak kadere sahip küresel bir topluluk oluşturmak için uluslararası işbirliği
Dünyayı etkisi altına alan yeni koronavirüs, devam eden küresel bir COVID-19 pandemi krizine neden oldu.Yeni koronavirüsün sınırları yok, hiçbir ülke COVID-19'a karşı bu savaştan kurtulamayacak.Dünya çapındaki bu COVID-19 pandemisine yanıt olarak Liming Bio-Products Corp, küresel topluluklarımızın refahını desteklemek için katkılarda bulunuyor.
Dünyamız şu anda yeni koronavirüs hastalığı 2019 (COVID-19) pandemisinin benzeri görülmemiş etkisiyle karşı karşıya.Bugüne kadar, bu hastalığın tedavisi için etkili bir ilaç mevcut değildir.Bununla birlikte, COVID-19'un tespiti için birçok tanı testi geliştirilmiştir.Bu testler, yeni koronavirüs spesifik nükleik asit veya antikor biyobelirteçlerini tespit etmek için moleküler veya serolojik yöntemlere dayanmaktadır.COVID-19 pandemik bir duruma ulaştığından, yeni koronavirüs enfeksiyonunun erken teşhisi, virüsün yayılmasının değerlendirilmesinde ve kontrol altına alınmasında kritik öneme sahiptir, ancak evrensel kullanım için mükemmel bir test henüz mevcut değildir.COVID-19 enfeksiyonunun taranması, teşhisi ve izlenmesi için potansiyel olarak hangi testlerin kullanılabileceğini ve sınırlamalarının neler olduğunu bilmeliyiz.Bu bilimsel araçlardan nasıl daha iyi yararlanılacağı ve hızla yayılan bu ciddi hastalığın ortaya çıkışını belirlemeye ve kontrol etmeye yardımcı olmak çok önemlidir.
Yeni koronavirüsün saptanmasının amacı, COVID-19 enfeksiyonu olan bir bireyin veya virüsü sessizce yayan asimptotik bir taşıyıcının olup olmadığını belirlemek, klinik tedavi için karar vermeye rehberlik edecek temel bilgileri sağlamaktır.Önceki çalışmalar, klinik kararların %70'inin test sonuçlarına bağlı olduğunu göstermiştir.Farklı saptama yöntemleri kullanıldığında, saptama reaktifi kitlerinin gereksinimleri de farklıdır.
Şekil 1
Şekil 1:COVID-19 enfeksiyonunun tipik zaman süreci boyunca genel biyobelirteç seviyelerinin temel aşamalarını gösteren diyagram.X ekseni, enfeksiyonun gün sayısını gösterir ve Y ekseni, viral yükü, antijen konsantrasyonunu ve farklı periyotlardaki antikor konsantrasyonunu gösterir.Antikor, IgM ve IgG antikorlarını ifade eder.Hem RT-PCR hem de antijen tespiti, erken hasta tespiti için doğrudan kanıt olan yeni koronavirüsün varlığını veya yokluğunu tespit etmek için kullanılır.Viral enfeksiyondan sonraki bir hafta içinde, PCR tespiti veya antijen tespiti tercih edilir.Yaklaşık 7 gün süren yeni koronavirüs enfeksiyonundan sonra, hastanın kanında yeni koronavirüse karşı IgM antikoru kademeli olarak artmıştır, ancak varlık süresi kısadır ve konsantrasyonu hızla azalır.Buna karşılık, virüse karşı IgG antikoru daha sonra, genellikle virüs enfeksiyonundan yaklaşık 14 gün sonra ortaya çıkar.IgG konsantrasyonu giderek artar ve kanda uzun süre kalır.Bu nedenle, hastanın kanında IgM tespit edilirse, erken enfeksiyon belirteci olan virüsün yakın zamanda enfekte olduğu anlamına gelir.Hastanın kanında IgG antikoru tespit edildiğinde, bu viral enfeksiyonun bir süredir var olduğu anlamına gelir.Geç enfeksiyon veya önceki enfeksiyon olarak da adlandırılır.Genellikle iyileşme döneminde olan hastalarda görülür.
Yeni koronavirüsün biyolojik belirteçleri
Yeni koronavirüs, proteinler ve nükleik asitlerden oluşan bir RNA virüsüdür.Virüs, konakçı (insan) vücudunu istila eder, hücrelere karşılık gelen reseptör ACE2 aracılığıyla girer ve konakçı hücrelerde çoğalarak insan bağışıklık sisteminin yabancı istilacılara tepki vermesine ve spesifik antikorlar üretmesine neden olur.Bu nedenle, şişe nükleik asitleri ve antijenleri ve yeni koronavirüse karşı spesifik antikorlar teorik olarak yeni koronavirüsün tespiti için spesifik biyobelirteçler olarak kullanılabilir.Nükleik asit tespiti için en yaygın olarak RT-PCR teknolojisi kullanılırken, yeni koronavirüse özgü antikorların tespiti için serolojik yöntemler yaygın olarak kullanılmaktadır.Şu anda, COVID-19 enfeksiyonunu test etmek için seçebileceğimiz çeşitli test yöntemleri bulunmaktadır [1].
Yeni koronavirüs için ana test yöntemlerinin temel ilkeleri
COVID_19 için şimdiye kadar birçok tanı testi mevcuttur ve her gün acil kullanım izni kapsamında onay alan daha fazla test kiti vardır.Yeni test geliştirmeleri çok farklı isimler ve formatlarla ortaya çıksa da, mevcut COVID_19 testlerinin tümü temel olarak iki ana teknolojiye dayanmaktadır: viral RNA için nükleik asit tespiti ve viral spesifik antikorları (IgM ve IgG) tespit eden serolojik immünolojik testler.
01. Nükleik asit tespiti
Ters transkripsiyon-polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR), döngü aracılı izotermal amplifikasyon (LAMP) ve yeni nesil dizileme (NGS), yeni koronavirüs RNA'sının saptanması için yaygın nükleik asit yöntemleridir.RT-PCR, hem Dünya Sağlık Örgütü (WHO) hem de ABD Hastalık Kontrol ve Önleme Merkezi (CDC) tarafından önerilen ilk COVID-19 testi türüdür.
02.Serolojik antikor tespiti
Antikor, virüs enfeksiyonuna yanıt olarak insan vücudunda üretilen koruyucu bir proteindir.IgM erken bir antikor türüdür, IgG ise daha sonraki bir antikor türüdür.Serum veya plazma numunesi, COVID-19 enfeksiyonunun akut ve iyileşme evrelerinin değerlendirilmesi için genellikle antikorun spesifik IgM ve IgG tiplerinin varlığı açısından incelenir.Bu antikor bazlı saptama yöntemleri arasında kolloidal altın immünokromatografi testi, lateks veya floresan mikrosfer immünokromatografisi, enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) ve kemilüminesans testi bulunur.
03.Viral antijen tespiti
Antijen, virüsün kan ve dokulardan temizlenmesi için antikorlar üretmesi için bağışıklık savunma sistemini tetikleyen, insan vücudu tarafından tanınan virüs üzerindeki bir yapıdır.Virüs üzerinde bulunan bir viral antijen, immünoanaliz kullanılarak hedeflenebilir ve tespit edilebilir.Viral RNA gibi viral antijenler de enfekte kişilerin solunum yollarında bulunur ve COVID-19 enfeksiyonunun akut fazını teşhis etmek için kullanılabilir.Bu nedenle, ilk antijen testi için sıklıkla tükürük, nazofaringeal ve orofaringeal sürüntüler, derin öksürük balgamı, bronkoalveolar lavaj sıvısı (BALF) gibi üst solunum yolu örneklerinin alınması önerilir.
Yeni koronavirüs için test yöntemlerinin seçilmesi
Bir test yönteminin seçilmesi, klinik ortam, test kalite kontrolü, geri dönüş süresi, test maliyetleri, numune toplama yöntemleri, laboratuvar personeli teknik gereksinimleri, tesis ve ekipman gereksinimleri gibi birçok faktörü içerir.Nükleik asitlerin veya viral antijenlerin tespiti, virüslerin varlığına dair doğrudan kanıt sağlamak ve yeni koronavirüs enfeksiyonu tanısını doğrulamak içindir.Antijen tespiti için birçok yöntem olmasına rağmen, bunların yeni koronavirüsün tespit hassasiyeti teorik olarak RT-PCR amplifikasyonundan daha düşüktür.Antikor testi, insan vücudunda üretilen, zaman içinde geciken ve genellikle virüs enfeksiyonunun akut fazında erken teşhis için kullanılamayan anti-virüs antikorlarının tespitidir.Tespit uygulamaları için klinik ayar değişebilir ve numune toplama siteleri de farklı olabilir.Viral nükleik asitlerin ve antijenlerin saptanması için numunenin, nazofaringeal sürüntüler, orofaringeal sürüntüler, balgam veya bronkoalveolar lavaj sıvısı (BALF) gibi virüsün bulunduğu solunum yolundan alınması gerekir.Antikor bazlı tespit için, kan örneğinin toplanması ve spesifik anti-virüs antikorunun (IgM/IgG) varlığı açısından incelenmesi gerekir.Ancak antikor ve nükleik asit testi sonuçları birbirini tamamlayabilir.Örneğin, test sonucu nükleik asit negatif, IgM negatif ancak IgG pozitif olduğunda, bu sonuçlar hastanın şu anda virüsü taşımadığını, ancak yeni koronavirüs enfeksiyonundan kurtulduğunu gösterir.[2]
Yeni koronavirüs testlerinin avantajları ve dezavantajları
Yeni Koronavirüs Pnömonisi Tanı ve Tedavi Protokolü'nde (Deneme Sürümü7) (Ulusal Sağlık Komisyonu ve Geleneksel Çin Tıbbı Devlet İdaresi tarafından 3 Mart 2020'de yayınlandı), yeni hastalığın teşhisi için altın standart yöntem olarak nükleik asit testi kullanılıyor. koronavirüs enfeksiyonu, antikor testi de tanı için doğrulama yöntemlerinden biri olarak kabul edilir.
Patojenik ve serolojik bulgular
(1) Patojenik bulgular: Yeni koronavirüs nükleik asidi, nazofaringeal sürüntüler, balgam, alt solunum yolu salgıları, kan, dışkı ve diğer örneklerde RT-PCR ve/veya NGS yöntemleri kullanılarak saptanabilir.Numunelerin alt solunum yollarından (balgam veya hava yolu ekstraksiyonu) alınması daha doğrudur.Numuneler, alındıktan sonra mümkün olan en kısa sürede test için gönderilmelidir.
(2) Serolojik bulgular: NCP virüsüne özgü IgM, başlangıcından yaklaşık 3-5 gün sonra saptanabilir hale gelir;IgG, akut faza kıyasla nekahat döneminde en az 4 katlık bir titrasyona ulaşır.
Bununla birlikte, test yöntemlerinin seçimi coğrafi konumlara, tıbbi düzenlemelere ve klinik ayarlara bağlıdır.ABD'de NIH, Coronavirus Hastalığı 2019 (COVID-19) Tedavi Kılavuzlarını yayınladı (Site Güncellemesi: 21 Nisan 2020 ) ve FDA, Halk Sağlığı Acil Durumu sırasında (16 Mart 2020'de yayınlandı) Coronavirus Hastalığı-2019 için Teşhis Testleri Politikası yayınladı ), burada sadece bir tarama testi olarak seçilen IgM/IgG antikorlarının serolojik testi.
Nükleik Asit Tespit Yöntemi
RT_PCR, yeni koronavirüs RNA'sının solunum veya diğer numunede bulunup bulunmadığını tespit etmek için tasarlanmış oldukça hassas bir nükleik asit testidir.Pozitif bir PCR test sonucu, COVID-19 enfeksiyonunu doğrulamak için numunede yeni koronavirüs RNA'sının varlığı anlamına gelir.Negatif bir PCR testi sonucu, virüs enfeksiyonunun olmadığı anlamına gelmez, çünkü kötü numune kalitesinden veya iyileşme aşamasındaki hastalık zaman noktasından vb. etkilenebilir.RT-PCR oldukça hassas bir test olmasına rağmen, birkaç dezavantajı vardır.RT-PCR testleri, büyük ölçüde örneğin yüksek kalitesine bağlı olarak emek yoğun ve zaman alıcı olabilir.Bu bir zorluk olabilir çünkü viral RNA miktarı sadece farklı hastalar arasında büyük ölçüde değişmekle kalmaz, aynı zamanda numunenin toplandığı zaman noktalarına ve ayrıca enfeksiyon fazlarına veya klinik semptomların başlangıcına bağlı olarak aynı hasta içinde değişebilir.Yeni koronavirüsü tespit etmek, yeterli miktarda bozulmamış viral RNA içeren yüksek kaliteli numuneler gerektirir.
RT-PCR testi, COVID-19 enfeksiyonu olan bazı hastalar için yanlış bir negatif sonuç (yanlış negatif) verebilir.Bildiğimiz gibi, yeni koronavirüsün ana enfeksiyon bölgeleri akciğerde ve alveoller ve bronşlar gibi alt solunum yollarında bulunur.Bu nedenle, derin bir öksürükten alınan balgam numunesi veya bronkoalveolar lavaj sıvısının (BALF) viral tespit için en yüksek duyarlılığa sahip olduğu kabul edilir.Bununla birlikte, klinik uygulamada, örnekler genellikle nazofaringeal veya orofaringeal sürüntüler kullanılarak üst solunum yollarından toplanır.Bu örneklerin toplanması sadece hastalar için rahatsız edici olmakla kalmaz, aynı zamanda özel eğitimli personel gerektirir.Örneklemeyi daha az invaziv veya daha kolay hale getirmek için, bazı durumlarda hastalara oral sürüntü verilebilir ve hastaların bukkal mukozadan veya dilden kendi kendilerine örnek almalarına izin verilebilir.Yeterli viral RNA olmadan, RT-qPCR yanlış negatif bir test sonucu verebilir.Çin'in Hubei eyaletinde, ilk tespitte RT-PCR duyarlılığı, ortalama %40 olmak üzere yalnızca %30-50 oranında rapor edilmiştir.Yanlış-negatif oranının yüksek olması büyük olasılıkla yetersiz örneklemeden kaynaklanmıştır.
Ek olarak, RT-PCR testi, karmaşık RNA ekstraksiyon adımlarını ve PCR amplifikasyon prosedürünü gerçekleştirmek için yüksek düzeyde eğitimli personel gerektirir.Ayrıca daha yüksek düzeyde biyogüvenlik koruması, özel laboratuvar tesisi ve gerçek zamanlı PCR cihazı gerektirir.Çin'de, COVID-19 tespiti için RT-PCR testinin, biyogüvenlik seviyesi 3 (BSL-3) uygulaması kullanılarak personel koruması ile biyogüvenlik seviye 2 laboratuvarlarında (BSL-2) gerçekleştirilmesi gerekmektedir.Bu gereksinimler kapsamında, Ocak ayının başından Şubat 2020'nin başına kadar, Çin Wuhan'ın CDC laboratuvarının kapasitesi günde yalnızca birkaç yüz vaka tespit edebildi.Normalde, diğer bulaşıcı hastalıkları test ederken bu bir sorun olmaz.Bununla birlikte, potansiyel olarak milyonlarca insanın test edileceği COVID-19 gibi küresel bir pandemi ile uğraşırken, RT-PCR, özel laboratuvar tesisleri veya teknik ekipman gereksinimleri nedeniyle kritik bir konu haline geliyor.Bu dezavantajlar, RT-PCR'nin tarama için verimli bir araç olarak kullanılmasını sınırlayabilir ve ayrıca test sonuçlarının raporlarında gecikmelere yol açabilir.
Serolojik antikor tespit yöntemi
Hastalığın seyrinin ilerlemesi ile özellikle orta ve geç evrelerde antikor tespit oranı çok yüksektir.Wuhan Central South Hospital'da yapılan bir araştırma, antikor tespit oranının COVID-19 enfeksiyonunun üçüncü haftasında %90'ın üzerine çıkabileceğini gösterdi.Ayrıca antikor, yeni koronavirüse karşı insan bağışıklık tepkisinin ürünüdür.Antikor testi, RT-PCR'ye göre çeşitli avantajlar sunar.İlk olarak, serolojik antikor testleri basit ve hızlıdır.Antikor yanal akış testleri, bakım noktası için 15 dakika içinde sonuç vermek için kullanılabilir.İkinci olarak, serolojik test ile tespit edilen hedef, viral RNA'dan çok daha kararlı olduğu bilinen antikordur.Toplama, taşıma, saklama ve test sırasında antikor testleri numuneleri genellikle RT-PCR numunelerinden daha stabildir.Üçüncüsü, antikor kan dolaşımında eşit olarak dağıldığından, nükleik asit testine kıyasla daha az örnekleme varyasyonu vardır.Antikor testi için gereken numune hacmi nispeten küçüktür.Örneğin, antikor lateral akış testinde kullanım için 10 mikrolitre parmaktan delinmiş kan yeterlidir.
Genel olarak antikor testi, hastalık seyri sırasında yeni koronavirüsün tespit oranını iyileştirmek için nükleik asit tespiti için bir ek araç olarak seçilir.Antikor testi bir nükleik asit testi ile birlikte kullanıldığında, olası yanlış pozitif ve yanlış negatif sonuçları azaltarak COVID19 teşhisi için test doğruluğunu artırabilir.Mevcut kullanım kılavuzu, bağımsız bir algılama formatı olarak iki tip testin ayrı ayrı kullanılmasını önermez, ancak birleştirilmiş format olarak kullanılmalıdır.[2]
Şekil 2:Yeni koronavirüs enfeksiyonunun tespiti için nükleik asit ve antikor test sonuçlarının doğru yorumlanması
Figür 3:Liming Bio-Products Co., Ltd. – Yeni koronavirüs IgM/IgG antikor ikili hızlı test Kiti (StrongStep®SARS-CoV-2 IgM/IgG Antikor Hızlı Testi, Lateks İmmünokromatografi)
Şekil 4:Kireçleme Bio-Products Co., Ltd. – StrongStep®Novel Coronavirus (SARS-CoV-2) Multiplex Real-Time PCR kiti (üç gen için algılama, floresan prob yöntemi).
Not:Bu son derece hassas, kullanıma hazır PCR kiti, uzun süreli saklama için liyofilize formatta (dondurarak kurutma işlemi) mevcuttur.Kit, oda sıcaklığında taşınabilir ve saklanabilir ve bir yıl boyunca stabildir.Her bir ön karışım tüpü, Ters transkriptaz, Taq polimeraz, primerler, problar ve dNTP substratları dahil olmak üzere PCR amplifikasyonu için gereken tüm reaktifleri içerir. Kullanıcılar, şablonla birlikte PCR dereceli su ekleyerek karışımı kolayca yeniden oluşturabilir ve ardından yükleyebilir amplifikasyonu çalıştırmak için bir PCR cihazına
Yeni koronavirüs salgınına yanıt olarak, Liming Bio-Products Co., Ltd., klinik ve halk sağlığı laboratuvarlarının COVID-19 enfeksiyonunu hızlı bir şekilde teşhis etmesini sağlamak için iki teşhis kiti geliştirmek için hızla çalıştı.Bu kitler, yeni koronavirüs salgınının hızla yayıldığı ülke ve bölgelerde geniş çaplı tarama için ve COVID-19 enfeksiyonu için teşhis ve doğrulama sağlamak için çok uygundur.Bu kitler yalnızca Önceden Bildirilmiş Acil Kullanım İzni (PEUA) kapsamında kullanım içindir.Testler, ulusal veya yerel makamların düzenlemeleri kapsamında sertifikalandırılmış laboratuvarlarla sınırlıdır.
Antijen algılama yöntemi
1. Viral antijen tespiti, nükleik asit tespiti ile aynı doğrudan tespit kategorisinde sınıflandırılır.Bu doğrudan tespit yöntemleri, numunedeki viral patojenlerin kanıtlarını arar ve doğrulama teşhisi için kullanılabilir.Bununla birlikte, antijen tespit kitlerinin geliştirilmesi, patojenik virüsleri tanıma ve yakalama yeteneğine sahip güçlü afinite ve yüksek hassasiyete sahip yüksek kaliteli monoklonal antikorlar gerektirir.Antijen saptama kitinin hazırlanmasında kullanıma uygun bir monoklonal antikorun seçilmesi ve optimize edilmesi genellikle altı aydan fazla sürer.
2. Şu anda, yeni koronavirüsün doğrudan tespiti için reaktifler hala araştırma ve geliştirme aşamasındadır.Bu nedenle, hiçbir antijen saptama kiti klinik olarak doğrulanmamıştır ve ticari olarak temin edilebilir.Daha önce Shenzhen'deki bir tanı firmasının bir antijen tespit kiti geliştirdiği ve İspanya'da klinik olarak test edildiği bildirilmiş olsa da, reaktif kalitesi sorunlarının varlığı nedeniyle test güvenilirliği ve doğruluğu doğrulanamadı.Bugüne kadar, NMPA (eski Çin FDA), klinik kullanım için henüz herhangi bir antijen tespit kitini onaylamamıştır.Sonuç olarak, çeşitli tespit yöntemleri geliştirilmiştir.Her yöntemin avantajları ve sınırlamaları vardır.Farklı yöntemlerden elde edilen sonuçlar doğrulama ve tamamlama için kullanılabilir.
3. Kaliteli bir COVID-19 test kiti üretmek, büyük ölçüde araştırma ve geliştirme sırasındaki optimizasyona bağlıdır.Kireçleme Biyo-Ürün Co.,Ltd.test kitlerinin en yüksek düzeyde performans ve tutarlılık sağladıklarından emin olmak için sıkı üretim ve kalite kontrol standartlarını karşılaması gerekir.Liming Bio-Product Co., Ltd.'deki bilim adamları, analitik kantifikasyonda en yüksek düzeyde performansı sağlamak için in vitro tanı kitlerini tasarlama, test etme ve optimize etme konusunda yirmi yılı aşkın deneyime sahiptir.
COVID-19 Pandemisi sırasında Çin hükümeti, uluslararası sıcak noktalarda salgın önleme malzemelerine yönelik büyük bir talep artışıyla karşı karşıya kaldı.5 Nisan'da, Devlet Konseyi Ortak Önleme ve Kontrol Mekanizması "Tıbbi Malzemelerin Kalite Yönetiminin Güçlendirilmesi ve Piyasa Düzeninin Düzenlenmesi" basın toplantısında, Bakanlık Dış Ticaret Departmanı birinci düzey müfettişi Jiang Fan, Ardından, uluslararası toplumun ihtiyaç duyduğu daha fazla tıbbi malzeme desteğini hızlandırmak ve ayrıca kalite kontrol, düzenleme ve ürünlerin yönetimini iyileştirmek için çabalarımızı iki yöne odaklayacağız. Çin'in küresel salgına ortaklaşa yanıt vermesine ve insanlık için ortak bir geleceğe sahip bir topluluk inşa etmesine katkı sağlayacağız.
Şekil 5:Liming Bio-Products Co.,Ltd.'nin yeni koronavirüs reaktifi, AB CE kayıt sertifikasını aldı
fahri sertifika
huşenşan
Şekil 6. Liming Bio-Products Co., Ltd., Wuhan Vulcan(HouShenShan) Dağ Hastanesi'ni COVID-19 salgınına karşı savaşmak için destekledi ve Wuhan Kızıl Haç onursal sertifikasını aldı.Wuhan Vulcan dağ hastanesi, Çin'deki şiddetli COVID-19 hastalarının tedavisinde uzmanlaşmış en ünlü hastanedir.
Yeni koronavirüs salgını dünyaya yayılmaya devam ederken, Nanjing Liming Bio-Products Co., Ltd., bu benzeri görülmemiş küresel tehdide karşı savaşmak için yenilikçi teknolojilerimizle dünya çapındaki toplulukları desteklemek ve onlara yardım etmek için adım adım ilerliyor.COVID-19 enfeksiyonunun hızlı bir şekilde test edilmesi, bu tehdidi ele almanın kritik bir parçasıdır.İnsanların ihtiyaç duydukları kritik test sonuçlarını alabilmeleri için ön saflardaki sağlık çalışanlarının eline yüksek kaliteli teşhis platformları sağlayarak önemli ölçüde katkıda bulunmaya devam ediyoruz.Liming Bio-products Co., Ltd.'nin COVID-19 pandemisine karşı mücadeledeki çabaları, küresel bir kader topluluğunun inşası için teknolojilerimizi, deneyimlerimizi ve uzmanlığımızı uluslararası topluluklara katkıda bulunmaktır.
Uzun Basış~Tara ve Bizi Takip Edin
E-posta: sales@limingbio.com
Web sitesi: https://limingbio.com
Gönderim zamanı: Mayıs-01-2020
